圓形濾紙色譜法分離氨基酸
一、原理
用各種標準氨基酸的混合物和幾種未知氨基酸在相同條件下的同一張圓形濾紙上進行層析。層析后濾紙上的氨基酸用茚三酮顯色劑顯色得到紙色譜和各種標準及未知 氨基酸的Rf值，將未知氨基酸的Rf值與各種標準氨基酸的Rf值相對照，以達到離、鑒定氨基酸的目的。必須注意手指印含有一定量的氨基酸，故不能用手直接 接觸分析用的濾紙和濾紙條， 要用鑷子鉗夾濾紙邊。
二、 儀器 和 試劑
1.圓形濾紙(直徑15厘米)、濾紙條(2x1 厘米)
2.毛細玻管
3.培養皿( 直徑 l1-12 厘米 )
4.電吹風機
5.噴霧器
6.鑷子、剪刀、圓規、直尺、鉛筆
7.標準氨基酸溶液：0.1%丙氨酸水溶液，0.1% 精氨酸水溶液，0.1% 亮氨酸水溶液(加微量NaOH 使之溶解)
8.層析溶劑： 正丁醇:醋酸:乙醇:水 =4:1:1:2(V/V) 混合后的上清液。
9.0.1%茚三酮溶液：0.1克茚三酮溶于100毫升95%乙醇中。
10.待測氨基酸樣品：丙氨酸、精氨酸、亮氨酸混合溶解(每種氨基酸的濃度均為0.1%) 。
三、操作：
1．濾紙的處理
取圓形濾紙一張以濾紙中心為圓心，用圓規畫半徑為1厘米的圓，在圓心處用打孔器打一個小孔。用鉛筆過圓心將濾紙分成4等份，并在濾紙邊緣上分別標上丙、精、亮、混字樣。
2．點樣
在圓規畫的圓周上每一等份的中點(即原點) 用干凈毛細玻管小心點上0.1%丙氨酸、 0.1%精氨酸、0.1%亮氨酸和混合氨基酸樣品，點樣直徑約為2毫米，不宜過大，并把濾紙放在空氣中晾干。
3．層析
將濾紙條卷成圓筒(如燈芯)，插入濾紙小孔，注意吻合緊密，勿使濾紙芯突出紙面，下端剛好接觸培養皿底為宜。用吸量管吸取層析溶劑5-10 毫升加入干燥、潔凈的培養皿中，勿使溶劑沾到培養皿的邊沿上，將點好樣品的濾紙平放在培養皿上，紙芯浸入層析溶劑中， 并迅速用同樣大小的培養皿嚴密覆蓋在上面。此時可見溶劑沿紙芯上升到圓形濾紙上，然后向濾紙四周徐徐擴散。待溶劑前沿到培養皿邊緣約0.5厘米處時，即可取出濾紙，拔出紙芯， 用鉛筆標出溶劑前沿的位置，用電吹風機吹干。
4．顯色
用噴霧器噴上0.1%茚三酮于濾紙上，應噴灑均勻，或用洗相的方式將濾紙在0.1%茚三酮溶液中浸泡一下，再用電吹風吹干或放入 烘箱 中于105℃烘干。此時可顯出各 氨基酸 的紫紅色弧形帶，用鉛筆標點各弧形色帶中心。
5．定性鑒定
量出每個弧形色帶中心到原點的距離和溶劑前沿到原點的距離，求出各標準 氨基酸 和混合氨基酸溶液中各氨基酸的Rf值，比較各孤形色帶Rf值及色澤，確定出混合氨基酸溶液中的各種氨基酸，解釋各種氨基酸為什么有移動速度的差別。
北京天優福康生物科技有限公司
官網：http://www.dhfpump.com/
服務熱線：400-860-6160
聯系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
