刀豆球蛋白A（ConA）凝集實驗

原理

刀豆球蛋白屬凝集素：凝集素（Lectin）是一類可結(jié)合特定糖基的蛋白質(zhì)。每個凝集素分子有兩個以上的結(jié)合位點。癌細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞所需凝集素的濃度比正常細(xì)胞低，這可能與細(xì)胞表面凝集素受體分布有關(guān)；正常細(xì)胞分散，癌細(xì)胞較集中，結(jié)合性增強(qiáng)。

材料與儀器

細(xì)胞
PBS ConA
振蕩器 玻璃板

步驟

1.  細(xì)胞懸液制備
用pH7.4的磷酸緩沖液（PBS）制成每毫升含10×104 個細(xì)胞的懸液；

2.  ConA PBS
用PBS配制成0.59 %的ConA液；

3.  凝集試驗
向若干凹孔玻璃板凹中加細(xì)胞懸液，每凹加0.1 ml，再分別加入ConAPBS 0.1 ml，使ConA的最終濃度依次為：100、50、25、12.5 和零（對照） μg；

4.  置微型振蕩器上振蕩5～10 分鐘后，觀察凝集現(xiàn)象。

5.  結(jié)果
如細(xì)胞懸液變成絮狀物，說明已發(fā)生凝集；細(xì)胞凝集反應(yīng)是測試細(xì)胞生物性狀的一個標(biāo)志。

注意事項

如果細(xì)胞懸液變成絮狀物，說明已發(fā)生凝集。

常見問題

細(xì)胞凝集反應(yīng)是測試細(xì)胞生物性狀的一個標(biāo)志。
來源：《組織培養(yǎng)和分子細(xì)胞學(xué)技術(shù)》（北京出版社）