PBS緩沖液配制

0.01M 磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法

PBS緩沖液是大家做ELISA實驗室必須用到的，其配置各有自己的方法，希望下面的方法對大家有些幫助！

稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調節溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4℃冰箱中。

需要注意的是，通常所說的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na 離子或K 離子的濃度，Na 離子和K 離子只是用來調節滲透壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在配置的時候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調PH、定容、滅菌消毒。

NaCl 8.0g ； KCl 0.2g ； Na2HPO4 1.44g ； KH2PO4 0.24g ；加蒸餾水至 1000ml，調節pH 到 7.4（用Na2HPO4或KH2PO4調節）。

用于免疫反應時可加入 0.1%疊氮鈉（0.1g/100ml PBS）;當試劑中含有辣根過氧化物酶時，嚴禁使用疊氮鈉，可改用0.01%柳硫汞。

PBS緩沖液配方

PH 7.6 7.4 7.2 7.0
H2O 1000 1000 1000 1000
NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5
Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2
NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4
根據經驗來看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數發生了改變，在經過晝夜的時間后，PH值會明顯改變（我親自測過偏酸）。所以做實驗的同學可要注意了，PH值可能會影響實驗結果，甚至可能導致陰性。所以務必記得這個時候和天氣，要加強實驗條件控制問題。每次使用前最好用試紙測一下過夜了的PBS，如果發生偏酸或偏堿，注意重新換新液。
PBS緩沖液

稱取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調pH值至7.4，加水定容至1L，常溫保存備用。
PBST緩沖液

取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中，混勻后即刻使用。現用現配。

如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調，但是有更方便的方法。

十倍稀釋以后，PH自動升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個可以先取少量試一試，配好之后再測一次~
PH8.0的PBS配方詳細
1. NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L
2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。
3. 滴加濃鹽酸將pH值調節至8.0，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。
4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
0.05mol/L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：
甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液：稱取磷酸氫二鈉9.465g 7.099g,加蒸餾水至1000ml ;
乙液：0.05mol/L KH2P04溶液: 稱取磷酸二氫鉀, 9.07g 6.803g,加蒸餾水至1000m1。
將甲乙液分裝在棕色瓶內，于4℃冰箱中保存，用時甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見下表:
pH 甲液ml 乙液mI
5.29 2.5 97.5
5.59 5.0 95.0
5.91 10.0 90.0
6.24 20.0 80.0
6.47 30.0 70.0
6.64 40.0 60.0
6.81 50.0 50.0
6.98 60.0 40.0
7.17 70.0 30.0
7.38 80.0 20.0
7.73 90.0 10.0
8.04 95.0 5.0